Diplômée d'un M2 biologie-santé, je construis un projet professionnel basé sur la recherche en physiopathologie. Je cherche donc un poste d'assistant ingénieur ou technicienne me permettant de continuer à manipuler les outils de la biologie, en laboratoire ou en entreprise dans le secteur de la santé.
Mon stage de master 1 (3 mois) et mon stage de master 2 (6 mois) ont été dans la continuité l'un de l'autre. J'ai ainsi pu avancer un projet portant sur l'étude d'une mutation du canal sodique cardiaque Nav1.5 associée à des épisodes de fibrillation auriculaire. Le canal Nav1.5 est capable d’interagir avec de nombreuses protéines dont certaines sont responsables de sa régulation comme la protéine 14-3-3η. La mutation H445D du gène SCN5A, localisée dans la zone de fixation de 14-3-3η sur le canal, a été identifiée comme cause de fibrillations atriales. Dans le but de démontrer l’impact éventuel de la mutation sur le courant sodique ainsi que sur la liaison du canal Nav1.5 avec 14-3-3η, des études electrophysiologiques ont été réalisées sur un modèle de réexpression hétérologue : des plasmides codants pour le canal Nav1.5, sauvage ou muté et co-exprimant ou non 14-3-3 ont été construits puis utilisés pour transfecter des cellules COS-7 sur lesquelles ont été réalisées des manipulations de patch-clamp en configuration ‘cellule entière’. Enfin, les interactions biochimiques entre les différents partenaires ont été étudiées par western blot et immunoprécipitations.
Institut du thorax, INSERM UMR 1087, sous la responsabilité de Mme Françoise Le Bouffant
Septembre 2012
à mai 2013
Stage
Nantes
France
Sous-clonage d'ADN dans un plasmide
Culture cellulaire (HEK 293)
Analyses des interactions biochimiques (Western Blot, Immunoprécipitations)
Détails de l'expérience
Dans le but de démontrer l’importance éventuelle d'une sérine (acide aminé phosphorylable) dans la liaison du canal sodique Nav1.5 avec la protéine partenaire 14-3-3, nous avons mis en œuvre pendant ce stage la construction de plasmides codant pour des séquences consensus mutées du canal. Deux types de mutations de cette sérine on été réalisée par clonage: en alanine (acide aminé non phosphorylable) et en acide aspartique (qui mime une phosphorylation permanente). Par transfection d'une une lignée de HEK293 avec ces mutants et, par les techniques d’Immunoprécipitation et de « Western Blotting », la fixation de 14-3-3 sur Nav1.5 dans chacun des cas a alors été évaluée.
